自體T淋巴細胞免疫治療已列為正式臨床治療項目,T細胞的體外誘導及免疫治療技術已趨于成熟,并取得良好的臨床療效,然而成功有效的過繼性免疫治療關鍵在于獲得足量、高活性的免疫效應細胞。有學者認為,免疫治療成功的關鍵之一是要獲得足夠數量和質量良好的T細胞。因腫瘤病人往往免疫系統受抑,細胞免疫功能低下,取自患者的PBMNC
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在數量和質量上給體外擴增免疫效應細胞帶來了困難,這是目前臨床上常見的現象,影響了療效。另外,免疫細胞需多次輸注才能達到較好的治療效果,多數醫療單位利用血細胞分離機采集單個核細胞,而這種采集方法價格昂貴,多次采集給患者帶來心理及身體的痛苦。
在免疫細胞療法技術成熟的今日,如果能預先儲存健康的免疫細胞,在日后有需要時加以應用,不但可以實踐疾病預防的概念,更能提升預防醫學的價值。PBMNC分離和凍存流程既是一種經濟實用的獨立操作方法。Ficoll是人工分離淋巴細胞的重要環節,選用高質量的試劑可使細胞分層集中而清晰,能**程度獲取純凈的PBMNC。經深低溫長期保存的PBMNC可以保持其原有的活性,其中T淋巴細胞的增殖能力未受明顯影響。
有研究結果顯示,凍存前細胞活力達到99.6(±0.4%)%,淋巴細胞回收率58.4%(±6.52%),符合臨床T細胞的體外誘導及培養的要求。含10%DMSO和右旋糖酐的凍存保護液中分別添加80%無血清培養液和80%自體血漿均顯示出良好的冷凍保護效果,在-196℃液氮中保存其2年仍能夠保持89.7%±3.82%的活力,為下一步臨床擇機實施抗腫瘤免疫效應細胞的誘導、擴增以及回輸治療提供了便利條件。建立的自體血漿冷凍保護流程亦適合凍存經誘導、擴增后的免疫效應細胞,證實使用冷凍過的外周血單個核細胞能夠定向誘導生成AIL細胞,并且其擴增能力、細胞純度和細胞毒活性均與新鮮細胞直接誘導生成的AIL細胞沒有明顯的差別。冷凍的外周血單個核細胞誘導的AIL細胞應用于臨床腫瘤治療提供了基礎,可根據腫瘤患者的治療方案隨時復蘇細胞,使現有的抗腫瘤免疫治療方法更加靈活多變。
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