注意事項:
液氮罐
1、注意無菌操作
2、細胞復蘇時融化凍存細胞速度要快,防止細胞損傷,細胞復蘇后的操作**在適宜溫度中進行,減少冷凍保護劑對細胞的毒性。
3、為了避免復蘇過程中細胞液中有冰晶的出現,破壞細胞膜及細胞內部結構。從液氮拿出來,要快速丟入37度水浴,等細胞液剛剛化完取出,加培養液稀釋。
4、細胞放入水浴中注意用鑷子夾住細胞凍存管并在水浴中不時晃動,使其受熱均勻,并防止水浴時水進入細胞凍存管污染細胞。打開細胞凍存管之前要用酒精棉球將凍存管消毒并晾干。
5、液氮一定的危險性,打開液氮罐取出細胞時,要注意防凍,戴防凍手套,防護眼睛。
6、如果凍存管密封不嚴,液氮可被吸入。由于解凍時凍存管中的氣溫急劇上升,將可能發生爆炸。復蘇過程中應蓋上恒溫水浴鍋的蓋。
細胞復蘇后貼壁細胞較少的原因:
1、凍存細胞時消化時間過長,導致細胞復蘇時失去鐵壁能力。
2、細胞凍存液的質量不好也會導致細胞死亡。
3、凍存液的量加的太多也不好。
液氮罐
4、凍存的時候把DMSO混均勻,會有一些影響,但不會太大。