液氮研磨如何操作?先了解一下液氮研磨原理吧!
液氮容器的準(zhǔn)備
液氮一般保存于
液氮罐中。實驗前先準(zhǔn)備一個保溫桶，將適量液氮轉(zhuǎn)移至保溫桶中，同時還要準(zhǔn)備一個不銹鋼或塑料湯勺，湯勺的柄不夠長時要想辦法加長，以免凍傷手。
組織的處理及用量
任何組織在獲得后如不立即使用，要盡快保存在低溫環(huán)境中(一196℃液氮中速凍，一70℃保存)。使用時，植物組織應(yīng)當(dāng)先用自來水清洗外表的泥沙，用單蒸水沖洗兩遍，用75%乙醇浸洗約30秒，再用滅菌雙蒸水沖洗兩遍，用無菌濾紙吸干，然后根據(jù)需要取適當(dāng)部位的組織。動物組織不必清洗，但要盡量剔除周邊的組織及血塊。組織的取量要比實際需要量大1一2倍，因為研磨時部分組織會粘在研缽和研棒上，會致部分組織樣本丟失。
研缽的固定
我們在實驗時發(fā)現(xiàn)，研缽在加液氮后溫度很低，外表會形成許多冰晶，用力研磨組織時易打滑，研缽內(nèi)的組織液氮混合物很容易濺出，造成組織丟失，也容易凍傷手。如果在研缽下墊些紗布或濾紙，雖不易滑動，但由于緩沖作用，研磨時不受力，不足取。后來我們作了如下改進(jìn):一是做個木支架，即選一塊厚約兩寸的木板，在上面挖個半球形圓洞(大小根據(jù)研缽大小而定)，木板兩端留一定長度以備手握之用，使用時將研缽卡在半球形洞中，既穩(wěn)當(dāng)又不會凍傷手;二是備一條干凈的毛巾或紗布(干的)，折成長條形，將研缽包圍起來，兩端合并后用手抓住，這個方法簡單實用，但要特別小心，以免凍傷。
液氮罐
研磨方法
空缽先用液氮預(yù)冷，再將研棒的上端用紗布包裹(用力時手不會痛)，組織**切成薄片，研磨時不易濺出，也更容易磨碎，研棒**頂著手心，這樣便于用力。研磨過程中要避免液氮干涸，研磨至細(xì)粉即可。待液氮剛蒸發(fā)完時，用一個小藥勺取出所需用量進(jìn)行下一步實驗，或者將組織粉末裝人容器內(nèi)，保存于一70℃的溫度下，以備下一步實驗用。使用得當(dāng)?shù)囊旱心ソM織法，將為下一步實驗成功奠定了基礎(chǔ)。值得一提的是，操作中所有接觸的器皿及耗材須清洗干凈并消毒。如果研磨組織用于提取RNA時，使用的器皿及耗材必須采用焦碳酸二乙醋(DEPC)滅活RNase并進(jìn)行高壓消毒處理。
